桥联亲和素-标记生物素法(BRAB)

桥联亲和素-标记生物素法(BRAB)是一种基于生物素与亲和素(或链霉亲和素)之间高亲和力特性的生物医学检测方法。以下是关于BRAB法的详细解释:
一、定义与原理
BRAB法,也称为桥联亲和素-标记生物素法(Bridged Avidin-Biotin Technique, BRAB),利用游离的亲和素(或链霉亲和素)作为桥联剂,将检测反应体系中的抗原-生物素化抗体复合物与标记生物素(如酶标生物素)连接起来,从而达到检测反应分子的目的。这种方法通过生物素和亲和素之间的多级放大作用,极大地提高了检测的灵敏度。
二、操作步骤
抗原-抗体反应:首先,将待检测的抗原与生物素化的特异性抗体进行反应,形成抗原-生物素化抗体复合物。
桥联亲和素的作用:然后,加入游离的亲和素(或链霉亲和素),该亲和素通过其多价性,能够同时与多个生物素分子结合,从而将抗原-生物素化抗体复合物与后续的标记生物素连接起来。
标记生物素的加入:最后,加入标记生物素(如酶标生物素),该标记生物素通过与亲和素结合,形成较大的、具有多级放大作用的晶格样网状结构,其中网络了大量酶分子。
三、特点与优势
高灵敏度:由于生物素化抗体分子上连有多个生物素,与游离的亲和素结合后,可以形成大量的酶分子聚集,通过酶促反应产生强烈的信号,从而提高检测的灵敏度。
高特异性:生物素与亲和素之间的结合具有高特异性和高专一性,可以减少非特异性干扰。
多级放大效应:生物素和亲和素之间可以通过多价性结合,形成网格状复合物,产生多级放大效应,进一步提高检测灵敏度。
操作简便:该方法相对其他检测方法来说,操作步骤较为简便,且能够在短时间内完成检测。
四、应用领域
BRAB法被广泛应用于各种生物医学实验方法中,如免疫检测、蛋白质相互作用研究、细胞生物学研究等。通过该方法,研究人员可以更加准确地检测和分析生物分子之间的相互作用和变化。


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